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聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理以及SDS聚丙烯酰胺凝
發布時間:2020-10-20 15:35:14 編輯:博旭環保 銷售熱線:185-3821-8884

聚丙烯酰胺凝膠電泳(英語:polyacrylamide gelelectrophoresis,簡稱PAGE)作用:用于分離蛋白質和寡核苷酸,聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯劑N,N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(AP),四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交聯成的具有網狀立體結構的凝膠,并以此為支持物進行電泳。

聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據不同蛋白質分子所帶電荷的差異,及分子大小的不同所產生的不同遷移率,將蛋白質分離成若干條區帶,如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質,蛋白質樣品電泳后,就應只分離出一條區帶。聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構,具有分子篩效應。它有兩種形式:非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)及SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)。

聚丙烯酰胺凝膠電泳

非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,并依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開,SDS-PAGE僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。該技術最初由shapiro于1967年建立,他們發現在樣品介質和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑(SDS即十二烷基硫酸鈉)后,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。

SDS聚丙烯酰胺凝膠是一種陰離子表面活性劑,能打斷蛋白質的氫鍵和疏水鍵,并按一定的比例和蛋白質分子結合成復合物,使蛋白質帶負電荷的量遠遠超過其本身原有的電荷,掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此,各種蛋白質SDS復合物在電泳時的遷移率,不再受原有電荷和分子形狀的影響,只是棒長的函數,這種電泳方法稱為SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱SDS—PAGE)。

由于SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可設法將電泳時蛋白質電荷差異這一因素除去或減小到可以忽略不計的程度,因此常用來鑒定蛋白質分離樣品的純化程度,如果被鑒定的蛋白質樣品很純,只含有一種具三級結構的蛋白質或含有相同分子量亞基的具四級結構的蛋白質,那么SDS—PAGE后,就只出現一條蛋白質區帶。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳可分為圓盤狀和垂直板狀、連續系統和不連續系統,本實驗采用垂直板狀不連續系統,所謂“不連續”是指電泳體系由兩種或兩種以上的緩沖液、pH和凝膠孔徑等所組成。

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